Ananias foi chamado pelo Senhor para uma missão especial. Ele deveria fazer contato com um homem que viria a Damasco e que Deus pretendia usar para levar o Evangelho aos gentios (não hebreus).
O Senhor falou com Ananias em uma visão e o capacitou de forma que pudesse impor as mãos sobre um homem cego que precisava recuperar a visão.
O homem a quem Ananias fora enviado era o oponente mais notório do cristianismo: Saulo de Tarso. Saulo disse em um julgamento que estava tão demasiadamente enfurecido com os discípulos que, muitas vezes, obrigava-os até a blasfemar e que, sem misericórdia, os perseguia mesmo por cidades estranhas.
Ananias falou ao Senhor: “De muitos tenho ouvido a respeito desse homem, quantos males tem feito aos teus santos em Jerusalém; e para aqui trouxe autorização dos principais sacerdotes para prender a todos os que invocam o teu nome”.
No caminho de Jerusalém para Damasco, Saulo encontrou Jesus. Enquanto uma luz brilhante marcava o céu, ele caiu por terra e ouviu uma voz perguntar: “Saulo, Saulo, por que me persegues?”. Saulo então respondeu: “Quem és tu, senhor?”. A voz lhe replicou: “Eu sou Jesus, a quem tu persegues; mas levanta-te e entra na cidade, onde te dirão o que te convém fazer”. Os companheiros de Saulo ouviram a voz, mas não viram ninguém.
Saulo ficou cego, e foi levado à casa de Judas, na rua Direita, em Damasco, onde ficou três dias sem comer e sem beber.
O Senhor explicou a Ananias onde encontrar Saulo. Orando, ele entrou na casa, curou Saulo e lhe falou sobre Jesus. “E agora, por que te demoras? Levanta-te, recebe o batismo e lava os teus pecados, invocando o nome Dele”, disse Ananias. Saulo se levantou, foi batizado por Ananias e ficou alguns dias em Damasco, com os mesmos discípulos que tinha planejado perseguir.
Apesar de sua missão e atuação corajosa, Ananias nunca recebeu uma menção especial por parte dos escritores.